PHASEOLIN SUBJECTED TO LIMITED PROTEOLYSIS BY PAPAIN-LIKE PROTEINASE: PRIMARY STRUCTURE AND CRYSTALLIZATION

Vitalie ROTARI, Krisna PRAK*, Tatiana STEPURINA, Diana MORARI, Natalia LAPTEVA, Bunzo MIKAMI*, Shigeru UTSUMI*, Karl WILSON**, Andrei SHUTOV Laboratory of Plant Biochemistry *Kyoto University, Japan **State University of New York at Binghamton, USA

Rezumat

Fazeolina, globulina de rezervă 7S din cotiledoanele seminţelor de Phaseolus vulgaris a fost supusă proteolizei limitate cu proteinaza papainică endogenă PP purificată din cotiledoanele plantulelor de fasole de 6 zile. Digestul a fost separat în două fracţii: prima cu masă moleculară mare (fazeolina-PP care reţine structura cuaternară), iar a doua cu masă moleculară mică (peptide eliberate). Structura primară completă a fazeolinei-PP a fost descrisă în baza rezultatelor combinate a mass-spectrometriei peptidelor eliberate şi a secvenării amino-terminale a fazeolinei-PP. Au fost obţinute câteva tipuri de cristale ale fazeolinei-PP. Cel mai bun cristal cu rezoluţia difracţiei razelor X de 5,5 Å a fost găsit că aparţine grupei spaţiale P6322, care diferă de grupa spaţială a cristalelor fazeolinei intacte. Este discutat rolul posibil al proteolizei limitate a fazeolinei induse de PP la degradarea ei in vivo.